|
Studiul unor terapii inovative in hemangioamele infantile aplicate selectiv in functie de forma bolii si faza evolutiva DATE GENERALE DESPRE PROIECT Finanţare: Buget de Stat - Ministerul Educaţiei, Cercetării şi Inovarii Programul PARTENERIATE IN DOMENIILE PRIORITARE Categoria de proiect: PC Valoarea proiectului (include şi alte surse atrase) : 2 000 000 lei Valoarea contractului (sursa numai buget de stat): 2 000 000 lei Durata contractului: 38 luni (oct 2008-dec 2011) INSTITUTIA COORDONATOARE Universitatea de Medicina si Farmacie „Carol Davila” Bucuresti, cu sediul în Bucureşti, str. Dionisie Lupu nr. 37, sector 1 cod 70183,
telefon – fax 3180720, www.uni-davila.ro/
cod fiscal (CUI) 4192910 reprezentat prin Rector Prof. Dr. Florian Popa şi Contabil sef Ec. Ioana CiocanDIRECTOR DE PROIECT Dr. Daniel Boda, CP II, medic primar dermato-venerolog Centru de Cercetare de Excelenta in Dermatologie al UMF „Carol Davila” cu sediul in Institutul de Diabet, Nutritie si Boli Metabolice “N. Paulescu”, Str. Gr. Manolescu nr. 22-24, sector 1, Bucuresti, tel/fax 0212221310. PARTENERIAT PARTENER 1: INSTITUTUL NAŢIONAL DE CERCETARE DEZVOLTARE ÎN DOMENIUL PATOLOGIEI ŞI ŞTIINŢELOR BIOMEDICALE
”VICTOR BABEŞ”, cu sediul în Bucureşti, Splaiul Independenţei 99 – 101, sector 5, Cod 050096, tel: 0213194530, fax: 0213194528,
e-mail:
This e-mail address is being protected from spambots. You need JavaScript enabled to view it
PARTENER 2: SPITALUL UNIVERSITAR DE URGENTA BUCUREŞTI PARTENER 3: SPITALUL CLINIC DE URGENTA PENTRU COPII „GRIGORE ALEXANDRESCU” BUCUREŞTI, cu sediul in Bucureşti, REZUMAT Proiectul propune un studiu interdisciplinar de cercetare fundamentala si clinica privind inducerea regresiei clinice totale in hemangioamele infantile (HI). Prin frecventa mare (pana 10% dintre copiii sub un an), afectarea varstelor tinere, efectele dismorfofobice si invalidante fizic si psihic, HI reprezinta o reala problema de sanatate publica. Acesta este motivul pentru care ne propunem studiul in vivo al unor markeri biochimici sangvini (VEGF, GLUT1, MMPs, MCP1, IGF2) si al unor markeri urinari (MMPs, VEGF si bFGF) cu rol in proliferarea si/sau regresia hemangioamelor, urmata de testarea in vitro pe linii celulare endoteliale a modelului experimental de studiu al implicarii acestora in etiopatogenia HI. Se va trece apoi la elaborarea unui model de studiu in vitro al etiopatogeniei hemangioamelor infantile pe culturi primare de celule endoteliale, izolate din biopsii de la nivelul leziunii, cu eventuala extindere a aplicatiei in monitorizarea terapiei HI. In paralel, proiectul isi propune studiul si evaluarea angiografiei ca metoda de diagnostic si clasificare a HI, precum si studiul a trei metode inovative de terapie: terapia fotodinamica, terapia cu laser si embolizarea angiografica ca metoda terapeutica la cazuri selectionate de HI, cu stabilirea indicatiilor si limitarilor metodelor. Proiectul se finalizeaza printr-un studiu interdisciplinar privind inducerea regresiei in hemangioamele infantile, comparativ prin cele 3 metode de tratament: terapie fotodinamica versus laser dye-pulse si versus embolizare angiografica, cu dozarea markerilor angiogeni inainte si dupa tratament. In aceasta etapa sunt colectate, sistematizate si prelucrate toate rezultatele etapelor anterioare: indicatii specifice ale celor trei terapii; expresia markerilor angiogeni inainte si dupa tratament; rezultatele terapiei; corelatii intre markerii angiogeni si evolutia si prognosticul HI. Unul dintre obiectivele proiectului şi, în egală măsură, un rezultat cuantificabil şi cu largă aplicabilitate îl reprezintă dezvoltarea pe baze stiintifice a unui ghid de management al hemangioamelor infantile, pornind de la studiul etiopatogeniei si a factorilor predictivi pentru evolutia si prognosticul afectiunii, pana la individualizarea conduitei terapeutice optime. Complexitatea proiectului si a metodelor propuse constau, in acest context, in modelul experimental al culturii de celule endoteliale ca model de studiu a etiopatogeniei HI si a factorilor de crestere si regresie, precum si in studierea comparativa a unor metode noi terapeutice cu efecte în prezent incomplet cuantificate. Rezultatele vor contribui la cresterea si eficientizarea activitatilor de cercetare fundamentala interdisciplinara, precum si la elucidarea etiopatogeniei HI, a cauzelor de evolutie si regresie, precum si la cuantificarea eficacitatii celor 3 metode noi de tratament: embolizare angiografica, terapie fotodinamica si laser dye-pulse. Managementul eficient al HI va determina scaderea costurilor ingrijirii acestor pacienti si va creste sansa includerii sociale prin reducerea handicapului, datorat afectarii fizice si psihice, pe care il dau actual hemangioamele. Studiile vor facilita definitivarea tezelor de doctorat si masterat ale tinerilor cercetatori implicaţi in proiect. Colaborarile anterioare ale cercetatorilor implicati in proiect creeaza premisele unui management eficient al cercetarii, diminuand riscurile proiectului. OBIECTIVE Obiective generale:
Obiective specifice:
Prezentul proiect are ca principal obiectiv dezvoltarea pe baze stiintifice a unui ghid de management a hemangioamelor infantile, pornind de la studiul etiopatogeniei si a factorilor predictivi pentru evolutia si prognosticul afectiunii, pana la individualizarea conduitei terapeutice optime. Scopul urmarit de colectivele interdisciplinare de cercetatori si clinicieni este optimizarea metodelor de obtinere a unei regresii complete a HI, pentru reducerea morbiditatii, a complicatiilor legate de afectiune, scaderea costurilor de ingrijire a copiilor cu HI, pentru obtinerea unui aspect functional, psihologic si cosmetic cat mai bun posibil, cu cresterea calitatii vietii acestor copii si a familiilor lor. ACTIVITATI DERULATE IN CADRUL PROIECTULUI - Structură cadru-
BUGET Valoarea totala din fonduri bugetare a proiectului este de 2000000 lei. 1. In transe (pe baza activitatilor realizate in fiecare etapa)
Parteneri implicaţi în proiect lei
B – Suma solicitata de la bugetul de stat C – Suma atrasa prin cofinantare
ECHIPA DE CERCETARE
REZULTATE In prezent, proiectul se afla in stadiul finalizarii fazei nr. 3. - Ghidul de diagnostic si tratament al HI, constituit in urma acestei lucrari, este un instrument de lucru necesar clinicianului. - Angiografia este cea mai fiabila metoda de diferentiere a hemangioamelor de malformatiile arteriovenoase. - Desi imaginea angiografica obtinuta prin angiografia digitala are o sensibilitate si specificitate de aproape 100%, reprezentand ²gold standardul² de definire a cestui tip de leziuni, utila atat in diagnosticul pozitiv al prezentiei si clasificarii tipului de hemangiom, cat si in diagnosticul diferential, in special cu malformatiile arteriovenose, in ultimul timp se impune utilizarea unor investigatii mai putin invazive cu rezultate apropiate precum angiografia IRM. Principalele avantaje ale acestei metode constau nu numai in evitarea manevrelor invazive transarteriale, a complicatiilor asociate substantei de contrast, dar mai ales in evitarea exunerii la radiatia ionizanta, ale carei efecte in special stocastice trebuie intotdeauna avute in vedere mai ales in cazul populatiei tinere, in mod particular copii si adultii tineri. - In acest fel ghidurile moderne de diagnostic si tratament stabilesc utilizarea angiografiei ca metoda de linie secundara in diagnosticare, in caz de dubiu in evaluarea echografica sau IRM. - Atitudinea conservatoare in ce priveste tratamentul laser in HI consta in utilizarea acestei metode (PDL pentru leziuni superficiale sau ndYAG pentru leziuni mai profunde si mai intinse) in cazul HI rapid evolutive cu tendinta la ulceratie sau in HI in faza de involutie, cu eritem rezidual. - In cazul pacientilor nostri tratati cu laser ndYAG, toti au obtinut o reducere a dimensiunii leziunii tratate cu peste 50%. - S-a realizat testarea modelului experimental de studiu al implicarii diverselor citokine in crestere si regresie pe celule endoteliale din linia HUVEC; citokinele alese pentru modelul experimental au fost: VEGF, MCP-1, MMP-1, TIMP-1 si combinatia MMP-1 + TIMP-1. - Au fost efectuate studii privind proliferarea si viabilitatea celulelor endoteliale de hemangiom (CEH) in prezenta MCP-1, MMP-1, TIMP-1, VEGF si combinatia MMP-1 + TIMP-1. - Pentru culturile celulare HUVEC si culturile de celule endoteliale din hemangiom s-au efectuat teste de proliferare celulara (MTS), viabilitate (LDH) si apoptoza (Anexina V-FITC) la 3 si 24 ore. - Efectele VEGF: HUVEC – proliferare crescuta peste valorile martor odata cu cresterea concentratiei de modulator si a timpului de incubare; cantitatea de LDH eliberata este mai crescuta decat a martorului, iar procentul de celule viabile este ridicat. CEH – proliferarea creste cu concentratia de modulator la 3 si la 24 ore. In cultura de 3 ore eliberarea de LDH este mai mare decat a martorului si creste cu concentratia, in timp ce in cultura de 24 ore desi LDH este mai mare decat martorul, valorile scad cu concentratia in concordanta cu testul de apoptoza, in care procentul de celule viabile la 24 ore este mai mare decat cel din cultura de 3 ore. Efectele induse de aplicarea in vitro a VEGF sunt analoge in cultura liniei standard HUVEC si CEH ceea ce indica mecanisme de actiune independente de tipul celulei endoteliale, respectiv imortalizata (HUVEC) sau primara (CEH). - Efectele MMP-1: HUVEC – inhibarea proliferarii cu cresterea concentratiei la 3 si 24 ore. Eliberarea de LDH este evidenta la 24 ore unde creste cu concentratia, iar procentul de celule apoptotice este crescut. La 3 ore procentul de celule viabile este mai mare. CEH – Pentru ambii timpi de incubare efectele MMP-1 sunt asemanatoare: stimularea proliferarii celulare la concentratii mici, eliberarea LDH mai mica decat a martorului dar creste cu concentratia; procentul celulelor viabile din testul apoptozei este mai crescut in cultura de 24 ore. Efectele induse de aplicarea in vitro a MMP-1 sunt diferite in cultura liniei standard HUVEC fata de CEH ccea ce indica sensibilitati celulare distincte la aceasta enzima. - Efectele TIMP-1: HUVEC – scaderea proliferarii chiar si la concentratii mari de modulator; se elibereaza cantitati mari de LDH la concentratii mari de TIMP-1; procentul de celule viabile fiind mai mic in cultura de 24 ore. CEH – in ambele culturi tendinta de inhibare a proliferarii; procent de celule viabile mai mare in cultura de 24 ore, in concordanta cu valorile de LDH eliberate la concentratii mici de modulator. Actiunea TIMP-1 este concordanta in ambele tipuri celulare investigate, respectiv prezinta actiune inhibitorie asupra capacitatii proliferative. - Efectele TIMP-1+MMP-1: HUVEC – inhibare a proliferarii in ambele culturi; valorile pentru LDH in cultura de 3 ore sunt mai mari decat ale martorului si cresc cu concentratia; cu toate acestea procentul de celule viabile din testul de apoptoza este ridicat. CEH – inhibare a proliferarii in cultura de 3 si 24 ore; valorile LDH cresc cu cresterea concentratiei de modulatori iar in cultura de 3 ore, se obtine un numar mai mare de celule apoptotice timpurii; procentul de celule viabile este mai mare in cultura de 24 ore. - MCP-1: HUVEC – in cultura de 3 ore proliferarea este mai mica decat martorul si creste cu concentratia de modulator, in timp ce in cultura de 24 ore este mai mare decat martorul la toate dozele utilizate; valorile LDH cresc cu concentratia, dar procentele de celule viabile sunt mari si asemanatoare in cele doua culturi. CEH – nu sunt efecte vizibile asupra proliferarii in cultura de 3 ore; la 24 ore are loc inhibarea proliferarii iar procentul de celule viabile este mai crescut in cultura de 24 ore. MCP-1 dezvolta efecte tranziente, rapide inhibitorii asupra HUVEC fara sa influenteze proliferarea CEH la timpi mici de incubare. - In sistemele experimentale investigate cu linia standard HUVEC si CEH viabilitatile prin testul de apoptoza au relevat valori ridicate, respectiv celule viabile peste 85% in populatia investigata. - Au fost realizate determinari ale concentratiilor de GLUT-1, MMP-1, TIMP-1, VEGF si MCP-1 in ser, urina si supernatante (culturi de celule din hemangiom la diferite intervale de timp). - Pentru GLUT-1, MCP-1 si VEGF s-a putut stabili un interval de valori normale pentru lotul martor. Numarul mic de pacienti cu hemangiom nu permite realizarea unei statistici. - In cazul MCP-1 se remarca cresteri ale valorilor pacientilor cu hemangiom comparativ cu valoarea medie a martorilor. Analiza supernatantelor de cultura de hemangiom a relevat prezenta in acestea a GLUT-1 si MCP-1. - Managementul HI este complex si depinde de marimea leziunii, de localizare, de existenta complicatiilor (cum ar fi hemoragia si ulceratia). Este importanta evaluarea preterapeutica care sa includa o echipa de medici specializati. Tratamentul trebuie ales in contextul prioritatilor: oprirea tendintei de crestere, a complicatiilor si aspectelor inestetice.
VALORIFICARE proiect Articole publicate: 1.Adriana Diaconeasa, Mihaela Anca Jian. Hemangioame infantile. Medic.ro an VII nr.61; 1/2010. Comunicari:
2. D.Ciotaru, M.Surcel, M.Dobre, I.R. Pirvu, R.Huica, G.Isvoranu, A.Diaconeasa, D.Boda, C.Ursaciuc. Experimental model on HUVEC endothelial cell line to study various cytokines involvement in tumor growth and regression. The 6th Balkan Congress of Immunology of Balkan Association of Immunological Societies (BAIS), The 40th National Conference of Romanian Society for Immunology (RSI). 28 aprilie – 1 mai 2010, Sibiu, Romania.
LINK-URI CATRE PAGINI DE INTERES
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Toate datele prezentate in aceste pagini sunt pur informative!
Informatiile oficiale pot fi gasite la avizierele si secretariatele U.M.F. "Carol Davila"